篩選出受精前后均有表達(dá)的 PbPH 作 為研究對(duì)象。因此，本研究制備了抗 PbPH 單 克隆抗體，通過 WB 和 IFA 檢測(cè) PbPH 的表達(dá)階 段和抗 PbPH 單克隆抗體的特異性，并通過體外配子體出絲和動(dòng)合子形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗 PbPH 單克 隆抗體的傳播阻斷效果。移液器 ( QZ07508，Thermo 公司) ; 垂直電泳槽 ( EPM-7552，上海天能科技 有限公司) ; 電轉(zhuǎn)槽 ( Bio-Pad，美國(guó)) ; 分析天 平 ( L-1660DTP，日本 Shimadzu) ; 電熱恒溫培 養(yǎng)箱 ( HH-B11-420，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠) ; OLYMPUS 顯微鏡及成像 系 統(tǒng) ( BX53， 日 本 OLYMPUS公司) ; 渦旋振蕩器 ( VOＲTEX-5，海 門其林貝儀器制造有限公司) 。

    為確定抗 PbPH 單克隆抗體是否影響動(dòng)合子形成，將苯肼處理過 的雌性 BALB /c 小鼠經(jīng)尾靜脈注射 1 × 106 個(gè) P． berghei感染的紅細(xì)胞，感染后第 3 天，取 10 μL 感染小鼠的尾血與 90 μL 動(dòng)合子培養(yǎng)基稀釋 的抗 PbPH 單克隆抗體/PBS ( 以 15、110、 150) 混合，19 ℃培養(yǎng) 24 h，固定培養(yǎng)物，以 抗-Pbs21 單克隆抗體 ( 1500) 標(biāo)記，熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)動(dòng)合子形成數(shù)。采用 SPSS 23. 0 軟件進(jìn)行 t 檢 驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P ＜0. 05 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。為了確定抗 PbPH 單克隆抗體是否識(shí)別伯氏 瘧原蟲蛋白，對(duì)純化后的裂殖體、配子體和動(dòng)合 子的裂解物進(jìn)行 Western blot ( WB) 分析。抗 PbPH 單克隆抗體主要識(shí)別配子體和動(dòng)合子，條 帶大小約 33 kDa，與預(yù)測(cè)的蛋白大小一致，在裂 殖體抗原中未檢測(cè)到相應(yīng)條帶。這與本 教研室之前的研究結(jié)果相符合，證實(shí)了抗 PbPH 單克隆抗體可以識(shí)別瘧原蟲配子體和動(dòng)合子。